双抗研发应用MSD案例2竞争配体结合,I

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双特异性抗体是一种可以同时结合两种特异性表位或目的蛋白的人工工程化抗体，具有同时结合两个不同表位的能力，可以起到一些特殊的生物学功能。比如将效应细胞直接靶向肿瘤细胞，增强其细胞毒性，提高抗体选择性和功能性，共刺激或抑制受体，避免免疫逃逸机制进而改善治疗效果，与两种单克隆抗体药物联合用药治疗相比，BsAb也减少了药物开发和临床试验的成本。MSD（MesoScaleDiscovery)（超敏多因子电化学发光分析仪：SQS）在双抗药物应用中案例广泛，尤其是免疫原性，药物代谢，T细胞激活，可溶性受体，IC50等。双抗研发应用MSD案例：药物代谢，T细胞激活，可溶性受体等中介绍了部分案例，本文集中介绍IC50，磷酸化蛋白定量，竞争配体结合的案例：

EGFR-cMet

年3月10日，FDA授予肺癌新药JNJ-（JNJ-）突破性的治疗称号，用于治疗EGFR外显子20插入突变且铂类化疗后持续进展的转移性非小细胞肺癌（NSCLC）患者。一旦获批，这将是EGFR外显子20插入突变肺癌患者的首款靶向疗法。9月29日，JNJ-注射液被国家药品监督管理局药品审评中心（CDE）纳入“拟突破性治疗药物品种”公示，用于治疗含铂双药化疗期间或之后进展或对含铂化疗不耐受的EGFR20号外显子插入突变的转移性或手术不可切除的NSCLC患者。EGFR外显子20插入突变大约占到所有EGFR突变非小细胞肺癌患者的9%，目前还没有获批的靶向药，预后很差。EGFR第20号外显子有插入突变的非小细胞肺癌（NSCLC）患者，通常对EGFR受体酪氨酸激酶抑制剂（TKI）治疗不敏感，与更常见的EGFR突变（19号外显子缺失/LR替代）的患者相比，预后更差。目前，这类患者群体的护理标准是常规细胞毒性化疗。

本研究MSD应用案例1：双抗IC50磷酸化蛋白定量

肿瘤裂解液样品使用MSD磷酸化试剂盒(p-EGFR,p-cMet,p-ERK,orp-AKT)。

JNJ-抑制配体诱导的肺癌细胞EGFR和cMet磷酸化（下图）。A、将H和H细胞血清饥饿，然后在JNJ-存在下用EGF（左）或HGF（右）刺激。检测磷酸化EGFR（左）或磷酸化cMet（右）的水平（RCL，相对化学发光）。B、使用MSD分析对JNJ-抑制磷酸化EGFR（亮条）和磷酸化cMet（暗条）的一组肺癌细胞系的IC50数据汇总。

JNJ-对肺癌细胞株磷酸化ERK和磷酸化AKT的抑制作用（下图）。A、使用MSD分析JNJ-抑制磷酸化ERK（亮条）和磷酸化AKT（暗条）的一组细胞系的IC50数据摘要。

用抗体和磷酸化ERK（B和D）和磷酸化AKT（D和E）处理B–E、H细胞（B和C）和H细胞（D和E），用MSD分析（RCL，相对化学发光）测定

本研究MSD应用案例2：双抗竞争配体结合

使用MSD高结合载量微孔板(MSDHighBindPlate)。

JNJ-和亲本EGFR抗体抑制EGF与EGFR-Fc蛋白的结合（下图左）：JNJ-和亲本cMet抗体抑制HGF与cMet-Fc蛋白的结合（下图右）。